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    生物分子相互作用技术服务

    服务背景
    蛋白间相互作用是生命现象发生的基础,研究其相互作用可以阐明生物反应的机理,揭示生命现象的本质。虽然有一些蛋白可以以单体的形式发挥作用,但是大部分的蛋白都是通过蛋白间相互作用或形成蛋白复合物来发挥作用的。近年来,研究分子相互作用的技术不断出现。德泰生物提供蛋白相互作用检测服务,包括Fortebio octet生物膜层光学干涉技术(BLI)、免疫共沉淀(CO-IP, Co-Immunoprecipitation)、GST pull-down等,能够实现对蛋白,小分子,抗体及Fab片段等相互作用的定性定量分析。
     
    实验原理
    生物膜层光学干涉技术(BLI)
    ForteBio Octet检测方法主要采用由ForteBio公司生产的全自动测试平台即Octet RED96分子间相互作用检测系统,可用于测量蛋白质与生物分子之间的相互作用。
    主要技术原理如下:
    当两列或几列光波在空间相遇时,会进行叠加,这种现象称为光的干涉。ForteBio Octet®仪器就是利用了光的干涉现象。ForteBio Octet®仪器内部有生物传感器,生物传感器底端由生物膜层覆盖,生物膜层可结合并固定生物分子。当具有一定带宽的可见光垂直入射生物膜层时,光在生物膜层的两个界面反射后形成一定波长的干涉波。当固定分子与溶液中分子发生相互作用时,生物膜层厚度增加,干涉光谱曲线向波长增加的方向移动,光波相位移动由工作站实时探测,对光波的相位移动进行分析便可定量得出传感器表面分子数量变化及相关浓度与动力学数据。

         
     

    服务检测范围
    可检测的样品包括:蛋白与蛋白,蛋白与小分子,抗原与抗体,蛋白和抗体Fab片段,DNA与DNA
    可测定的数据包括:判断分子间有无亲和力;测得判断分子间亲和力及解离速率数据,包括结合常数,解离常数和亲和常数。
     
     
    服务优势
    和传统的免疫共沉淀方法对比
    动力学数据实时测定:可实时检测分子间相互作用动力学数据,可实现对分子间瞬时相互作用的检测。
    更高的通量、更快的实验流程:8-16个样品同时检测,是非标记技术中通量最高的;15-30分钟可以完成96个样品的分析。
    更宽的应用范围:直接检测粗制的样品,甚至是样品中存在不溶解的成分,耐受各种溶液环境,只有结合到传感器表面的分子才会被检测。病毒颗粒等大分子样品也能得到动力学结果。
    结果精准:精细的定量化分析,并获得动力学参数以获得更多的生物学信息。非标记,非变性检测,更能真实的反应情况。
     
    服务内容(以咨询结果为准)
    服务内容 交付内容 交付时间 定价
    样品制备(可选) 蛋白/抗体/抗体制备 4-6周 询价
    分子间亲和力定性 亲和力报告(定性报告) 3-4周
    亲和力测定 亲和力报告(定量报告);结合常数(Ka)、解离常数(Kd)和亲和常数(KD);亲和力强弱排序;
     
     






    样品提交说明
    1.提供的样品蛋白/抗体量大于50ug,小分子大于300ug;
    2.样品液体储存的缓冲液不含有Tris,建议PBS缓冲液。
     
    常见问题解答
    1:如何选择分子间相互作用检测方法?
    技术 ForteBio Octe CO-IP GST pull-down
    原理 生物膜层光学干涉技术(BLI) 抗原抗体反应的特异性 GST对谷胱甘肽偶联球珠的特异性
    筛选互作蛋白 ×
    验证互作蛋白
    瞬时互作作用 × × ×
    弱亲和力检测 × ×
    定量分析 × ×
    定性分析
     
    2:常用术语解释
    BLI:生物膜干涉技术
    Ka/Kon:结合常数,单位M-IS-I,代表了单位时间内产物生成速率;
    Kd/Koff:解离常数,单位S,单位时间内产物降解成反应物的百分比;
    KD:亲和力常数,单位M,代表了亲和作用的强弱;
     
    3:如何根据KD值判断亲和力的强弱?
    不同反应的“强”“弱”的标准:
    对于小分子而言(<2KD):亲和力在10-4-10-7M,如果KD<100nm(10-7M),那么这种小分子的结合能力就比较强。
    对于蛋白而言(如抗原抗体反应):亲和力在10-8-10-11M,如果KD>100nm(10-7M),那么这种小分子的结合能力就比较弱。
     
    参考文献
    1. Nature--Publication Genentech Binding Kinetics of non-Antibody Fragments on Octet RED
    2. Nature-Publication NIMR DNA-Protein Binding Affinity Characterization
    3. PLOS-Publication FGC University Antiviral Peptide Binding to Dengue Virus Proteins
    4. PNAS--Autophosphorylation of Tyr-610 in the receptor
    5. Publication Genentech Characterization of Integral Membrane Protein Specific Fabs and IgG
     
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