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    杭州ag8亚游集团生物技术有限公司

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    免疫印迹(Western blotting)技术服务

    技术原理:

           将通过SDS-PAGE电泳分离的蛋白质转移到固相载体(NC膜或PVDF膜)上,利用已知的特异性抗体与抗原(即组织细胞中的目的蛋白)能特异性结合的原理,通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂(如酶、金属离子、同位素)显色或发光来对组织细胞内目的蛋白定性及半定量的研究。由于免疫印迹具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,一直做为蛋白分析的常规检测技术在广泛使用。免疫印迹用于鉴定样本中目标蛋白的存在和初步量化分析。

    注:提供每张膜上8-10个样品,或者13-15个样品,检测一种蛋白。

     服务内容:

    1 蛋白质抽提:

          实验对象为组织样品:分别称取各个组织约0.5 g置于研钵中,加入液氮研磨至粉末状。再分别加入1.0 mL裂解液(含PMSF),裂解30 min收集到于1.5 mL离心管中。冰浴下用匀浆器匀浆;最后 12000 rpm离心30 min,收集上清分装于1.5 mL离心管中并置于-80 保存。

          实验对象为细胞样品:将各组细胞于3000 rpm离心10 min,弃上清;用PBS(含PMSF)清洗3次,再分别加入0.3 mL裂解液(含PMSF),裂解30 min。冰浴下超声破碎细胞,功率100W,工作10 s,间歇10 s,工作次数15次;最后 12000 rpm离心30 min,收集上清分装于1.5 mL离心管中并置于 -80 保存。

      2 蛋白质定量:用经典的Lowry 法测定样品浓度。

      3 免疫印迹实验

      4 结果检测及数据分析:提供一份完整实验报告;各目的蛋白胶片和扫描图。

     

     客户方需提供:

           1 样品要求:客户需提供新鲜或正确保存的蛋白样品,建议提供阳性对照。同时要求客户提供详尽的实验信息,如:样本质量描述,样本处理方法,目的蛋白相关资料,是否做过实验及碰到的主要问题等等。

         A. 细胞样品:

             1) 冷冻细胞:细胞培养或处理结束后,去除培养液,PBS清洗3次,收集细胞(贴壁细胞用刮刀刮下,悬浮细胞离心收集)于冻存管中放入干冰或-80冰箱中保存,干冰运输。

             2) 新鲜细胞:细胞培养或处理结束后,去除培养液,PBS清洗3次,收集细胞(贴壁细胞用刮刀刮下,悬浮细胞离心收集)用PBS(含PMSF)悬浮,干冰运输。

             3) 细胞数量均不少于106 个/1个目的蛋白。

        B. 组织样品:请将30 mg以上的组织样本,并分装为两管。-80或者液氮贮存,干冰运输。

        C. 蛋白样品:细胞裂解样品总蛋白量≥0. 1mg总蛋白/1个目的基因,浓度在0.5~2 µg/µl为佳;组织样品总蛋白浓度在5-15 µg/µL为佳。 建议客户提供蛋白提取方法,方便后续实验针对不同处理的蛋白作出相应处理。

       2 一抗:建议客户选用有本质保证的一抗,以权威文献中报导的抗体为准,如:CSTABcamZymed等著名抗体公司。

       3 内参、二抗:由我公司提供。

       4 客户应对所提供的材料及信息负责,如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。
      

     服务承诺:

    1 实验所需试剂及耗材由本公司免费提供,用户无须另行购买。

        2 本公司承诺对实验结果以及客户所提供的资料保密,未经客户许可,我方绝不会将客户的实验内容、实验结果和相关信息对外公布。

        3 签订合同后,在第二日起开始检测工作;

        4 本公司负责对客户提供的样品进行蛋白提取、电泳及Western杂交检测技术服务,并提交给甲方电子版检测报告,包括详细操作程序和Western Blot图片、原始胶片以及完整的实验报告;

        5 具体以服务合同内条款为主。


     服务特色:

    1 高质量的产品支持: 基于Life technologies公司一整套创新的Western Blotting解决方案,极大地提高检测的灵敏度,且操作简单快捷,更可大大缩短Western Blot检测时间。

        2 检测灵敏度高:可检测到10-150 pg 的目的蛋白。

         3 完善的物流配送:针对杭州市客户,我们可以上门取样,免去您寄送样品的繁琐程序。

        4 贴心的配套服务:为客户提供实验观摩学习服务,让您近距离体验并学习ag8亚游集团生物服务专家的实验技能。